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登革熱IgM抗體的檢測流程

發(fā)布時間:2014-5-27 14:20:16??????瀏覽次數(shù):

1.  目的

根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)ws216-2008,規(guī)范本中心登革熱IgM抗體的檢測。

2.  適用范圍

2.1  適用于血清或血漿中登革熱IgM抗體的檢測。

3.  職責(zé)

檢測人員:負(fù)責(zé)按照本檢測細(xì)則對被測樣品進(jìn)行檢測。

復(fù)核人員:負(fù)責(zé)對檢測操作是否規(guī)范以及檢測結(jié)果是否準(zhǔn)確進(jìn)行復(fù)核。

科室負(fù)責(zé)人:負(fù)責(zé)對檢測操作的監(jiān)督和檢測結(jié)果的審核。

4.  規(guī)程:親和素-生物素法檢測登革熱IgM抗體。

4.1  原理:在微孔條上包被生物素化抗原,配以酶標(biāo)記抗人IgM單克隆抗體作為標(biāo)記抗原及TMB顯色劑等其它試劑,采用親和素-生物素法檢測登革熱IgM抗體。

4.2  試劑

4.2.1  生物素化抗原預(yù)包被板

4.2.2  陰性、陽性對照

4.2.3  酶結(jié)合物

4.2.4  30X濃縮洗滌液。(用蒸餾水130稀釋使用)

4.2.5  顯色劑A、B液。

4.2.6  終止液。

4.2.7  封片。

4.3  儀器與設(shè)備

4.3.1  20-200μL可調(diào)移液器。

4.3.2  電熱恒溫水溫箱。

4.3.3  微量振蕩器。

4.3.4  洗板機(jī)、酶標(biāo)儀。

4.4  操作步驟

參照試劑盒說明書或按以下步驟操作。

4.4.1  將試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封。

4.4.2  加樣:將待檢標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液141稀釋(5ul-200ul,于反應(yīng)板中加稀釋好的待檢標(biāo)本及陰陽對照各100ul/孔,設(shè)空白對照一孔(不加任何液體),輕輕混勻。37℃溫育30分鐘。

4.4.3  甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗板3次并拍干。

4.4.4  加酶結(jié)合物:每孔2滴,混勻后置37℃溫育30分鐘。

4.4.5  4.4.3步驟。

4.4.6  顯色:每孔加顯色劑A、B各一滴,用震蕩器混勻,后置37℃溫育10分鐘

4.4.7  用酶標(biāo)儀讀數(shù),取波長450nm,先用空白孔校零,然后讀取各孔OD值。

4.4.8  結(jié)果判斷

4.4.8.1  P/N=標(biāo)本OD/陰性對照OD

4.4.8.2  P/N2.1為陽性;

 

4.4.8.3  1.5P/N<2.1 為可疑標(biāo)本;P/N<1.5為陰性。

4.4.8.4  陰性對照(NC)小于0.10時以0.10計,大于0.1小于0.21時以實(shí)際OD值計算;若大于0.21時,實(shí)驗(yàn)可能出現(xiàn)了較大誤差,需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

4.4.8.5  陽性對照(PC)值≥0.4,實(shí)驗(yàn)成立,否則需重做。

4.6  注意事項

4.6.1  從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔反應(yīng)條應(yīng)置37℃平衡30分鐘后方可使用,余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同時,待測標(biāo)本需置室溫平衡30分鐘后再行測試。

4.6.2  使用前試劑應(yīng)搖勻,并棄去12滴后垂直滴加。

4.6.3  封片不能重復(fù)使用。

4.6.4  結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。

4.6.5  不同批號的試劑不可混用。

4.6.6  待測標(biāo)本不可用NaN3防腐,如需稀釋標(biāo)本,請用小牛血清稀釋。

4.6.7  洗滌時每孔均須加滿,防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。

4.6.8  避免用溶血、混濁或脂血標(biāo)本。

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