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漢坦病毒IgM 捕捉ELISA 法(MacELISA) 實(shí)驗(yàn)

發(fā)布時(shí)間:2014-3-8 9:44:12??????瀏覽次數(shù):

           IgM 捕捉ELISA 法(MacELISA)檢測出血熱IgM 抗體


本試劑盒系采用抗人μ 鏈捕獲人血清IgM 抗體,加辣根過氧化物酶-病毒
抗原標(biāo)記物,用以檢測出血熱特異性IgM 抗體。具有較高的敏感性、特異性和重
復(fù)性。特別適用于出血熱的早期特異性診斷及其它實(shí)驗(yàn)性研究。本試劑盒為96
人份/包裝。
試驗(yàn)材料:
(1)抗人IgM 抗體(μ 鏈):用pH9.5 的包被液包被酶標(biāo)板
(2)凍干陽性血清/凍干陰性血清1 支, 0.2ml/支,工作濃度為1:10;
(3)凍干辣根過氧化物酶-病毒抗原標(biāo)記物1 支, 0.5ml/支,工作濃度為
1:20;
(4)凍干小牛血清1 支,1ml/支;
(5)濃縮洗液(10 倍濃縮)1 瓶,50ml;(標(biāo)本稀釋液為含5%小牛血清原倍
洗液);
(6)A/B 顯色液和終止液各1 瓶。
(凍干試劑先用相應(yīng)量的去離子水溶解,然后臨用前根據(jù)所需按工作濃度稀
釋使用,余下的放-20℃保存)
(7)終止液:4N H2SO4
(8)酶標(biāo)儀。
檢測步驟:
(1)將待檢血清用稀釋液100 倍稀釋,加入已包被抗人μ 鏈抗體的酶標(biāo)板
一孔中,100μl/孔,同時(shí)加入已1:10 稀釋的陽性血清/陰性血清對照各一孔,
100μl/孔,置37℃水浴孵育1 小時(shí)。
(2)棄去血清,用PBS-T 漂洗5 遍,甩干。
(3)將凍干辣根過氧化物酶-病毒抗原標(biāo)記物1:10 稀釋后,加入反應(yīng)板
相應(yīng)孔內(nèi),100μl/孔,37℃水浴孵育1 小時(shí)。
(4)棄去酶標(biāo)抗體,用洗滌液洗滌6 次,甩干。
(5)加顯色液:于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B 液各一滴,37℃,避光3~5 分鐘。
(6)加終止液(4NH2SO4)于每反應(yīng)孔,一滴/孔。
結(jié)果判斷:
(1)目測方法:
陽性對照孔呈明顯藍(lán)色,陰性對照孔呈無色,對照成立;若待檢血清孔呈明
顯淡藍(lán)色或深藍(lán)色(TMB),則標(biāo)本為出血熱IgM 抗體陽性,反之陰性。
(2)酶聯(lián)免疫檢測儀檢測:
于450nm(TMB)陽性對照孔OD 值/陰性對照孔OD 值,即P/N≥2.1,對照成
立;若待檢血清孔OD 值與陰性對照孔OD 比值≥2.1,則標(biāo)本為流行性出血熱IgM
抗體陽性,反之陰性。
(陰性對照孔OD 值小于0.05 按0.05 記,若大于0.05 按實(shí)際數(shù)值計(jì)算)
意義:
陽性結(jié)果,表明患者新近漢坦病毒感染,用于出血熱早期診斷。

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