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C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒

2013-7-24 11:49:49??????點(diǎn)擊:

C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

實(shí)驗(yàn)原理
包被板上包被有抗CRP抗體,與稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣本一起孵育,孵育中,CRP特異性結(jié)合包被抗體,洗板除去未結(jié)合的血清蛋白,抗原-抗體混合物與過(guò)氧化物酶酶聯(lián)物抗體反應(yīng),洗滌除去為結(jié)合酶聯(lián)物,加入含有TMB和過(guò)氧化氫的著色液孵育,與微孔板結(jié)合的免疫復(fù)合物的量與顏色強(qiáng)度成正比,加0.5M硫酸終止反應(yīng),450nm處檢測(cè)吸光值
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度和OD值做標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣本CRP濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出
此試劑盒在美國(guó)僅用于科研
試劑盒組成

1、包被板,96孔,包被有抗人CRP單克隆抗體

2、標(biāo)準(zhǔn)品,5瓶,0.2ml,含1/10的預(yù)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,濃度為:00.4;1;5;10ug/ml

3、酶聯(lián)物,1瓶,12ml,含過(guò)氧化物標(biāo)記的抗人CRP單抗;抗菌劑和惰性紅色染料

4、樣本稀釋液,1瓶,40ml5X濃縮,含0.09%NaN 3和抗菌劑,惰性綠色染料

5、洗滌液,1瓶,50ml20X濃縮,含磷酸緩沖洗滌液

6、底物液,1瓶,15ml,含過(guò)氧化氫和TMB

7、終止液,1瓶,12ml,0.5M硫酸 
實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供

1、精確移液器和槍頭

2、標(biāo)準(zhǔn)容積的潔凈玻璃器皿

3、樣本稀釋用的潔凈玻璃試管

4、酶標(biāo)儀(450nm) 
貯存條件
2-8

1、將微孔板條貯存于原裝含干燥劑的密封袋內(nèi),直至全部用完

2、不要使用過(guò)期的試劑
樣本采集與準(zhǔn)備
此實(shí)驗(yàn)可用到血清和血漿
采樣后立即分離出血清,避免使用溶血,脂血或黃疸血,可能回導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果
將血清轉(zhuǎn)移干凈試管
樣本可在2-8℃下貯存幾天,或凍存更長(zhǎng)時(shí)間,避免反復(fù)凍融
一般注意事項(xiàng)
1使用一次性加樣槍頭加樣,避免交叉污染.
2
實(shí)驗(yàn)前,將所有試劑平衡至室溫.試劑混勻時(shí)避免產(chǎn)生氣泡.
3
一旦實(shí)驗(yàn)開(kāi)始,所有實(shí)驗(yàn)步驟應(yīng)中斷進(jìn)行
4
吸光值是孵育時(shí)間和溫度的一條函數(shù).所以應(yīng)控制好實(shí)驗(yàn)加樣,建議每次只做20份樣品和一組標(biāo)準(zhǔn)品,作雙份檢測(cè). 
試劑準(zhǔn)備
洗滌液:用去離子水稀釋50ml的洗滌濃縮液至總體積為1000ml,稀釋洗滌液可在2-8℃下至少放置1個(gè)月
過(guò)高溫度可能回引起濃縮洗滌液出現(xiàn)渾濁,其并不會(huì)有影響,稀釋后就會(huì)變澄清 
樣本稀釋液:用去離子水稀釋40ml的樣本稀釋濃縮液至總體積為200ml,2-8℃下可放置3個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間,始終保持澄清
 
實(shí)驗(yàn)步驟

1、10倍預(yù)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品血清按如下方法進(jìn)行1:100稀釋?zhuān)?/span>

10ul的標(biāo)準(zhǔn)品至稀釋試管內(nèi),加990ul的已稀釋的樣本稀釋液,混合

2、樣本按1:1000分兩步進(jìn)行稀釋?zhuān)?/span>10ul的樣本血清與990ul的已稀釋的樣本稀釋液,混合;加450ul的已稀釋的樣本稀釋液與50ul100X的預(yù)稀釋樣本,混合(注意:稀釋樣本貯存不要超過(guò)8小時(shí))

3、將100ul的稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加入相應(yīng)微孔內(nèi)

4、室溫下蓋板孵育30±2min

5、洗滌緩沖液洗板3

可選用合適的自動(dòng)洗板機(jī)洗板,或手動(dòng)洗板:迅速倒到孔內(nèi)反應(yīng)液,再注入稀釋洗滌液.第三次洗板時(shí),讓稀釋洗滌液在微孔內(nèi)停留23分鐘.每次洗板都要換新的稀釋洗滌液.最后倒掉所有溶液并在吸水紙上拍干,去除殘留液滴.

1、每孔加100ul的酶聯(lián)物,蓋板室溫下孵育30±2min

2、重復(fù)步驟5)洗板

3、每孔加100ul的底物液

4、避光,室溫下孵育10±2min

5、每孔加50ul的終止液

6、加入終止液后,30min內(nèi)450nm處酶標(biāo)儀上讀數(shù)

 
結(jié)果分析與說(shuō)明
以標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度均值與相應(yīng)的濃度建立最優(yōu)標(biāo)準(zhǔn)曲線.
患者樣品的濃度通過(guò)測(cè)的吸光值直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度.
根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或可利用的計(jì)算機(jī)方法,也可用其它數(shù)據(jù)簡(jiǎn)化分析.
最低檢測(cè)濃度
最低檢測(cè)濃度約為0.02 μg/ml.

 

本譯文由廣州健侖生物科技有限公司編譯,僅供參考,請(qǐng)以原說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)或與我們公司工作人員聯(lián)系!

 

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