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什么是膠體金法?

2013-9-26 15:15:15??????點(diǎn)擊:

什么是膠體金法

簡(jiǎn)介

免疫膠體金技術(shù)的基本原理:

    膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),形成帶負(fù)電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài),故稱膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷,可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合,由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合,所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。    膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外,還可以與許多其它生物大分子結(jié)合,如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀,如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng),加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性,因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。    膠體金標(biāo)記,實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過(guò)程。吸附機(jī)理可能是膠體金顆粒表面負(fù)電荷,與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價(jià)結(jié)合,因而在基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn)中成為非常有用的工具。     免疫金標(biāo)記技術(shù)(Immunogold labelling technique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標(biāo)蛋白結(jié)合處,在顯微鏡下可見(jiàn)黑褐色顆粒,當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí),肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn),因而用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)方法中,這一反應(yīng)也可以通過(guò)銀顆粒的沉積被放大,稱之為免疫金銀染色。

功能

    常用的免疫膠體金檢測(cè)技術(shù):

(1)免疫膠體金光鏡染色法    細(xì)胞懸液涂片或組織切片,可用膠體金標(biāo)記的抗體進(jìn)行染色,也可在膠體金標(biāo)記的基礎(chǔ)上,以銀顯影液增強(qiáng)標(biāo)記,使被還原的銀原子沉積于已標(biāo)記的金顆粒表面,可明顯增強(qiáng)膠體金標(biāo)記的敏感性。

2)免疫膠體金電鏡染色法      可用膠體金標(biāo)記的抗體或抗抗體與負(fù)染病毒樣本或組織超薄切片結(jié)合,然后進(jìn)行負(fù)染。可用于病毒形態(tài)的觀察和病毒檢測(cè)。 斑點(diǎn)免疫金滲濾法 (3)應(yīng)用微孔濾膜(如膜)作載體,先將抗原或抗體點(diǎn)于膜上,封閉后加待檢樣本,洗滌后用膠體金標(biāo)記的抗體檢測(cè)相應(yīng)的抗原或抗體。 (4)膠體金免疫層析法      將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,膠體金標(biāo)記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上,當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后,通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng),溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng),當(dāng)移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí),待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留,聚集在檢測(cè)帶上,可通過(guò)肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條,使用十分方便。

廣州健侖生物科技有限公司

                                                                                 徐華

20021020

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