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黑熱病快速檢測(cè)卡（美國(guó)INBIOS）

預(yù)期使用

    該檢測(cè)條用于診斷內(nèi)臟利什曼病，利用快速的免疫層析法在人血清中定性檢測(cè)杜氏利什曼原蟲（L. donovani）抗體。該實(shí)驗(yàn)有助于診斷內(nèi)臟利什曼?。?/span>VL）。并只用于體外診斷。

實(shí)驗(yàn)原理

  該檢測(cè)條的硝化纖維膜在實(shí)驗(yàn)區(qū)包被了rK39，在質(zhì)控區(qū)包被了雞抗蛋白A。在實(shí)驗(yàn)中，血清樣本與膠體金共軛物（膠體金標(biāo)記的蛋白A）反應(yīng)，而膠體金共軛物預(yù)先包被在檢測(cè)條上?；旌衔镌诿?xì)管作用下沿著硝化纖維膜移動(dòng)，然后與重組的VL抗原反應(yīng)，并生成一條紅色帶。如果存在該紅色帶表明陽(yáng)性結(jié)果，反之則為陰性結(jié)果?；旌衔锢^續(xù)移動(dòng)，到達(dá)固化的雞抗蛋白A區(qū)（質(zhì)控區(qū)），會(huì)在質(zhì)控區(qū)生成一條紅色帶。質(zhì)控區(qū)紅色帶的出現(xiàn)說(shuō)明樣本體積充足、液體流動(dòng)適宜和作為對(duì)試劑的質(zhì)控。

保存方法

    該密封袋或者瓶中含實(shí)驗(yàn)檢測(cè)條應(yīng)保存在20—28℃（室溫）直至有效期。瓶中含捕獲緩沖液也應(yīng)保存在20—28℃。暴露在超過(guò)30℃溫度下會(huì)影響實(shí)驗(yàn)性能，所以應(yīng)盡量避免。檢測(cè)條不應(yīng)冰凍保存。從密封袋中取出后應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)使用，避免受濕度影響。

血清的采集

1該實(shí)驗(yàn)中應(yīng)使用人血清。全血樣本不應(yīng)采用，因?yàn)檫^(guò)度的背景可能會(huì)影響正確讀取實(shí)驗(yàn)帶。應(yīng)使用緩沖液稀釋血清，避免直接開始實(shí)驗(yàn)。陽(yáng)性血清應(yīng)使用陰性血清進(jìn)行稀釋。

2 經(jīng)凝血后離心分離血清，盡量避免溶血。

3 應(yīng)在采集血清后盡快開展實(shí)驗(yàn)。血清不能長(zhǎng)時(shí)間存放在室溫下。血清于2-8℃可保存3天。否則血清應(yīng)保存在20℃以下。

4 實(shí)驗(yàn)前血清平衡至室溫。冰凍的血清必須充分融解。血清避免反復(fù)凍融。

5 如果血清需要運(yùn)輸，其包裝應(yīng)該符合聯(lián)邦的傳染源運(yùn)輸法規(guī)。

試劑盒成分

該黑熱病快速檢測(cè)條的硝化纖維膜在實(shí)驗(yàn)區(qū)包被了重組的rK39，在質(zhì)控區(qū)包被了雞抗蛋白A。試劑盒的成分如下：

1、25份的獨(dú)立包裝檢測(cè)條或者25份檢測(cè)條于一個(gè)含干燥劑瓶子中。

2、1瓶的捕獲緩沖液

實(shí)驗(yàn)步驟

1 實(shí)驗(yàn)前讓血清平衡至室溫。

2 從密封袋或瓶中取出黑熱病快速檢測(cè)條

3 在檢測(cè)條箭頭下方加入20 ul的血清。

4 將檢測(cè)條置于實(shí)驗(yàn)管中，或者96孔的組織培養(yǎng)板的微孔中，根據(jù)檢測(cè)條上的箭頭，其末端應(yīng)該朝下。

5 加入2-3滴（150ul）的捕獲緩沖液

6 在10分鐘內(nèi)讀取結(jié)果。在讀取結(jié)果前，背景的清晰是十分重要的。尤其是當(dāng)樣本為低滴度的抗利什曼原蟲抗體時(shí)，就只有一條很弱的色帶出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)區(qū)（T）。10分鐘后讀取可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

注意：不要只是加入捕獲緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。必須首先加入20ul的血清。

      如果在加入捕獲緩沖液后的10-15秒并沒(méi)有觀察到膠體金的移動(dòng)，可輕輕壓檢測(cè)條上的樣本加入?yún)^(qū)，直到觀察到膠體金的移動(dòng)。

結(jié)果解釋

陽(yáng)性結(jié)果

實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性則質(zhì)控帶和實(shí)驗(yàn)帶均出現(xiàn)，如圖1。陽(yáng)性結(jié)果表明檢測(cè)到杜氏利什曼原蟲抗體。一條微弱的色帶也為陽(yáng)性結(jié)果。作為解釋指南，實(shí)驗(yàn)區(qū)的紅色帶的顏色強(qiáng)度與抗利什曼原蟲抗體濃度相關(guān)。實(shí)驗(yàn)帶為“弱陽(yáng)性”血清樣本，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能為弱陽(yáng)性紅色帶與紅點(diǎn)之間，幾乎為白色背景（“弱陽(yáng)性”樣本則含有對(duì)重組抗原低親和力或者低滴度抗體）。

陰性結(jié)果

實(shí)驗(yàn)為陰性，則只有質(zhì)控帶出現(xiàn)。一個(gè)陰性結(jié)果表明無(wú)檢測(cè)到杜氏利什曼原蟲抗體。沒(méi)有出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)帶，如圖2。

無(wú)效結(jié)果

則無(wú)出現(xiàn)質(zhì)控帶也沒(méi)有出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)帶。如果沒(méi)有出現(xiàn)質(zhì)控帶該實(shí)驗(yàn)也無(wú)效，即使出現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)帶。建議使用新的檢測(cè)條和新血清再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

注意：實(shí)驗(yàn)區(qū)的紅色帶的變化是依賴于抗利什曼原蟲抗體濃度。然而，該實(shí)驗(yàn)不能檢測(cè)抗體的定量值和增加的百分比。

預(yù)期值：

在流行的地區(qū)，該黑熱病快速檢測(cè)條靈敏度為90%或更高。而特異性可能因不能地區(qū)而不同。例如在印度104名健康人中超過(guò)13名為陽(yáng)性反應(yīng)。

本譯文由廣州健侖生物科技有限公司編譯，僅供參考，請(qǐng)以原說(shuō)明書為準(zhǔn)或與我們公司工作人員聯(lián)系！