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植物DNA 提取技術(shù)介紹 (DNeasy Plant Mini Kit)

發(fā)布時間:2015-7-14 15:17:48??????瀏覽次數(shù):
 

簡介:

從植物細(xì)胞、組織或真菌細(xì)胞樣本中分離總DNA,產(chǎn)量可達30 μg

1.高純度DNA,無污染物和酶抑制劑

2.快速純化得到即用型DNA

3.無需有機抽提,無需乙醇沉淀

DNeasy Plant Mini Kit通過基于硅膠膜的離心柱形式,可快速便捷的純化DNA。常規(guī)產(chǎn)量為3–30 μg高品質(zhì)DNA,產(chǎn)量取決于樣本來源。DNeasy Plant Mini KitDNA純化過程可在QIAcube全自動核酸純化儀上自動化進行。

詳細(xì)信息:

性能

DNeasy Plant Maxi Kit可快速高效的純化高品質(zhì)DNA,可以從不同種類的植物和組織樣本中進行純化,包括較難處理的樣本來源(參見"Selection of plant species processed with DNeasy Kits")。樣本可以是新鮮、冷凍或者風(fēng)干的。優(yōu)化的DNeasy Plant操作流程與QIAshredder Maxi離心柱結(jié)合使用,獨特的過濾和勻質(zhì)柱,能夠有效的去除細(xì)胞碎片并且優(yōu)化裂解后的樣本處理流程。

DNeasy Kits處理的植物種類簡表

Abies alba(銀杉)

Nicotiana tabacum(煙草)

Aesculus hippocastanum(七葉樹)

Oryza sativa(水稻)4

Arabidopsis thaliana(擬南芥)

Pelargonium sp.(天竺葵)4

Avena sp.(燕麥)

Petunia sp.4

Brassica napus(油菜)

Pinus sylvestris(歐洲赤松),P. brutia5

Brassica oleracea(大頭菜)

Populus tremula(白楊)

Chicorium endivia(菊苣)

Pseudotsuga menziesiiDouglas 冷杉)

Citrullini lanatus(西瓜)

Quercus robur, Q. petrea(橡樹)6,7

Egeria sp.

Rhododendron sp.2,4

Fagus sylvatica(櫸木)1

Rubus idaeus(覆盆子)

Helianthus spp.(向日葵)

Solanum tuberosum(土豆)

Hordeum vulgare(大麥)2

Sphagnum palustre(苔)

Humulus sp.(酒花)

Spinacia oleracea(菠菜)

Hydrilla sp.

Taxus baccata(紅豆杉)

Kalanchoe spp.

Triticum aestivum(小麥)4

Lupinus sp.

Ulmus glabra(榆樹)6

Lycopersicon esculentum(番茄)3

Vitis spp.(葡萄)6

Myriophyllum sp.

Zea mays(玉米)

幼葉或針葉(以及其他組織,如上)收集并立即速凍。使用DNeasy Plant Mini Kit進行DNA提取。1山毛櫸、2干葉、3愈傷組織、4年植物上的葉子、5胚乳、6富含碳水化合物的老樹葉、7芽。包括真菌在內(nèi)的其他物種的DNA提取的詳細(xì)信息,請聯(lián)系QIAGEN公司的技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐慕?jīng)銷商。

常規(guī)產(chǎn)量為3–30 μg,樣本量達100 mg濕重,洗脫體積為50–400 μl。DNA產(chǎn)量因種類和組織的不同而不同,取決于基因組大小、倍體、細(xì)胞數(shù)量和組織樣本的年齡。較低和較高的范圍值分別對應(yīng)擬南芥和小麥。

DNeasy Plant操作流程制備純核酸,無多糖和其他使用常規(guī)方法純化產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物。這些雜質(zhì)可能會干擾分光讀數(shù)并抑制酶反應(yīng)。DNeasy純化的DNA的吸光度掃描在260 nm處顯示對稱峰,證明DNA無酶抑制劑等雜質(zhì)。DNeasy純化的DNA最長為40 kb。純化的DNA可用于多種應(yīng)用。

原理

DNeasy Plant Kits使用先進的硅膠膜技術(shù)和簡單的離心操作流程從植物組織和細(xì)胞或者真菌中提取高純度的細(xì)胞總DNA。DNeasy技術(shù)取代繁瑣的DNA提取操作流程,如十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、苯酚或者氯仿萃取。使用DNeasy操作流程不需要乙醇沉淀,純化的DNA可以直接使用。DNeasy樣本制備技術(shù)已經(jīng)過認(rèn)證。

操作流程

首先對樣本進行機械攪拌,然后進行化學(xué)裂解。在裂解過程中,RNARNAase消化去除。細(xì)胞碎片、沉淀的蛋白質(zhì)和多糖都被去除,并且樣本通過QIAshredder Maxi離心柱并離心實現(xiàn)勻漿。調(diào)節(jié)緩沖溶液條件,并將裂解產(chǎn)物上樣到DNeasy Plant Maxi離心柱中。在短暫的離心過程中,DNA選擇性結(jié)合到硅膠膜上,污染物通過。余下的污染物和酶抑制劑經(jīng)過一或者兩步高效的洗滌步驟去除。然后,用水或者低鹽緩沖溶液將純化的DNA洗脫,待用。

應(yīng)用

DNeasy Plant Mini Kit適用于從植物組織中純化DNA,包括:

植物細(xì)胞 

植物組織 

真菌

技術(shù)參數(shù):

特點

參數(shù)

Applications

PCR, real-time PCR, blotting

Elution volume

50–400 μl

Format

Spin column

Main sample type

Plant samples

Processing

Manual

Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein

DNA

Sample amount

<100 mg

Technology

Silica technology

Time per run or per prep

<1 hour

Yield

3–30 μg

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